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Research center of Embrapa/Collection: Embrapa Gado de Corte - Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento (INFOTECA-E)
Issue Date: 2011
Type of Material: Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento (INFOTECA-E)
Authors: BITENCOURT, G. de A.
CHIARI, L.
VALLE, C. B. do
LAURA, V. A.
MORO, J. R.
Additional Information: Gislayne de Araujo Bitencourt, Estudante de mestrado em Genética e Melhoramento de Plantas na Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho” UNESP Campus de Jaboticabal; LUCIMARA CHIARI, CNPGC; CACILDA BORGES DO VALLE, CNPGC; VALDEMIR ANTONIO LAURA, CNPGC; José Roberto Moro, Professor Titular do Departamento de Biologia aplicada à Agropecuária na Universidade Estadual Paulista ”Júlio de Mesquita Filho” UNESP Campus de Jaboticabal.
Title: Avaliação de diferentes métodos para extração de RNA total de folhas e raízes de braquiária.
Publisher: Campo Grande, MS: Embrapa Gado de Corte, 2011.
Series/Report no.: (Embrapa Gado de Corte. Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento, 29)
Language: pt_BR
Keywords: Braquiária.
Description: A extração de RNA a partir de tecidos específicos consiste no primeiro passo para estudos de expressão gênica e caracterização de transcritos. Plantas, em geral, contêm grande quantidade de compostos fenólicos e/ou polissacarídeos em seus tecidos, o que pode comprometer a extração e purificação de moléculas de RNA. O objetivo principal deste trabalho foi testar diferentes protocolos para extrair RNA total de folhas e raízes de braquiária. Sementes de Brachiaria decumbens cv. Basilisk foram germinadas e plântulas com12 dias foram utilizadas. As extrações de RNA foram feitas em duplicatas de 200 mg de amostras de folhas ou raízes pulverizadas com nitrogênio líquido. Para as extrações de RNA de folhas foram testados os reagentes Trizol® e Brazol® e para as extrações de RNA de raízes foram testados estes reagentes mais dois kits comerciais: SV Wizard Isolation RNA system (Promega®) e Invisorb Spin Plant RNA Mini Kit (Invitek®). ANOVA e teste Tukey (1% de significância) foram utilizados para comparar as médias das concentrações e de qualidade das amostras de RNA extraídas. Os resultados mostraram diferenças não-significativas entre as concentrações e a qualidade do RNA extraído de folhas pelos reagentes Trizol® e Brazol®. Entretanto, para as amostras de raízes as concentrações e qualidade do RNA isolado foram significativamente diferentes, sendo o reagente Trizol® mais eficiente. Os dois kits isolaram menores concentrações de RNA com qualidade inferir a obtida com os dois reagentes testados. Para síntese de DNA complementar (cDNA) foram testadas duas enzimas: SuperScript RTII (Invitrogen®) e M-MLV-RT (Sigma®), sendo esta última mais eficiente, pois foi possível obter maior quantidade e qualidade de cDNA, com relação a presença de contaminantes. Esses resultados podem ser considerados como ponto de partida para a execução de trabalhos sobre expressão gênica em espécies de Brachiaria.
Thesagro: Melhoramento Genético Vegetal
Pastagem.
Year: 2012-03-22
Appears in Collections:Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento (CNPGC)

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