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DC FieldValueLanguage
dc.contributor.authorBRESOLIN-SOARES, A. P.pt_BR
dc.contributor.authorCASTRO, C. M.pt_BR
dc.contributor.authorOLIVEIRA, A. C. dept_BR
dc.contributor.authorMITTELMANN, A.pt_BR
dc.contributor.authorANTHONISEN, D.pt_BR
dc.contributor.authorNOLASCO, G. da S.pt_BR
dc.contributor.authorSILVA, V. N.pt_BR
dc.date.accessioned2011-04-09T16:08:28Z-
dc.date.available2011-04-09T16:08:28Z-
dc.date.created2008-03-25pt_BR
dc.date.issued2007pt_BR
dc.identifier.citationPelotas: Embrapa Clima Temperado, 2007.pt_BR
dc.identifier.urihttp://www.infoteca.cnptia.embrapa.br/infoteca/handle/doc/595783pt_BR
dc.descriptionESTABELECIMENTO DE METODOLOGIA PARA ANÁLISE MOLECULAR DE AZEVÉM ANUAL COM MARCADORES AFLP. O uso de marcadores moleculares no manejo de bancos de germoplasma tem sido cada vez mais expressivo. Entre os diferentes tipos de marcadores moleculares, o AFLP, Amplified Fragment Length Polymorphism, apresenta algumas vantagens para uso na caracterização de recursos genéticos, como a detecção de grande número de bandas informativas por reação, com ampla cobertura do genoma e considerável reprodutibilidade, além de não necessitar de dados de seqüenciamento prévio da espécie para a construção de primers. Embora a análise de AFLP seja freqüentemente utilizada em estudos de variabilidade genética em diferentes espécies, o uso da técnica em Lolium multiflorum ainda é incipiente. Com a finalidade de estabelecer um protocolo para o emprego da técnica de AFLP em azevém anual foi conduzido este trabalho. Foram avaliadas as concentrações iniciais de DNA genômico de 100 e 250 ng, a digestão do DNA com 1,25 e 1U das enzimas EcoRI e MSe, e os respectivos tempos de reação de digestão: 3, 6 e 12 horas. Também foram avaliadas quatro concentrações da solução resultante da ligação dos adaptadores: solução sem diluição; diluída 1:5; 1:10 e 1:20 e duas diluições após a reação de pré-amplificação, de 1:25 e 1:50. Como resultado, foi estabelecido como melhor protocolo, no qual foi obtido um maior número e qualidade de fragmentos, o que utiliza a concentração inicial de DNA genômico de 100 ng, num volume final de reação de digestão 10 ?l, com 1U de cada enzima EcoRI e MseI e tempo de reação de 12h a 37°C, com reação de ligação de adaptadores realizada com a adição da solução de ligação de adaptadores, do Kit AFLP? Analysis System I (InvitroGen Life Technologies, Carlsbad, Calif., USA), e 0,4 U de T4 DNA ligase em um volume final de 10?l, por 2h a 20°C. Após a ligação de adaptadores a diluição deverá ser de 1:5. A reação de pré-amplificação deverá ocorrer a partir de 1?l desta última solução (diluída 1:5), 1,0 X PCR buffer com Mg Plus [Tris-HCl (pH 7.6) 20 mM, MgCl2 1,5 mM, KCl 50 mM], BSA 0,003% e 1 U de Taq DNA polimerase, completando com mix de pré-amplificação do Kit AFLP? Analysis System I até alcançar o volume final de 11?l. O produto da pré-amplificação deverá ser diluído 1:25 antes de ser procedida à amplificação seletiva, a qual deve ser realizada utilizando 2,5 ?l da solução de DNA pré-amplificado (diluído 1:25), 1 X PCR buffer com Mg Plus [Tris-HCl (pH 8,4) 20 mM, MgCl2 1,5 mM, KCl 50 mM], BSA (0,003%), 1 U de Taq DNA polimerase, 10 ng de primer EcoRI, 1,5 ng de primer MseI, 0,4mM de DNTps e H2O MilliQ? até completar o volume final de 10?l. Com este protocolo uma única combinação de primers permitiu identificar 58 bandas polimórficas na análise de duas populações de azevém anual.pt_BR
dc.language.isoporpt_BR
dc.relation.ispartofseries(Embrapa Clima Temperado. Comunicado Técnico, 179).pt_BR
dc.rightsopenAccesspt_BR
dc.subjectProtocolopt_BR
dc.titleOtimização de protocolo para análise de AFLP em Lolium multiflorum Lam.pt_BR
dc.typeFolhetospt_BR
dc.date.updated2011-04-10T11:11:11Zpt_BR
dc.subject.thesagroAzevémpt_BR
dc.subject.thesagroAnálisept_BR
dc.format.extent28 p.pt_BR
riaa.ainfo.id595783pt_BR
riaa.ainfo.lastupdate2008-07-21pt_BR
dc.contributor.institutionAdriana Pires Bresolin Soares, UFPEL; Caroline Marques Castro, Embrapa Clima Temperado; Antonio Costa de Oliveira, UFPEL; Andréa Mittelmann, Embrapa Gado de Leite; Denilson Anthonisen, Embrapa Clima Temperado; Vanessa Neumann Silva, UFPEL.pt_BR
Appears in Collections:Comunicado Técnico (CNPGL)

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