Título:	Metodologia para a detecção da resistência aos benzimidazóis em Haemonchus contortus utilizando amostras em pool.
Autor:	NICIURA, S. C. M. IBELLI, A. M. G. CORRÊA, L. G. P. OKINO, C. H. CHAGAS, A. C. de S.
Afiliación:	SIMONE CRISTINA MEO NICIURA, CPPSE; ADRIANA MERCIA GUARATINI IBELLI, CPPSE; LORRANE GABRIELE PINHEIRO CORRÊA, UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA JÚLIO DE MESQUITA FILHO; CINTIA HIROMI OKINO, CPPSE; ANA CAROLINA DE SOUZA CHAGAS, CPPSE.
Año:	2025
Referencia:	São Carlos, SP: Embrapa Pecuária Sudeste, 2025.
Descripción:	Resumo: A alta prevalência do nematoide gastrintestinal Haemonchus contortus, cujo controle é dificultado pela resistência anti-helmíntica, leva a grandes prejuízos econômicos na criação de ovinos. A genotipagem de polimorfismos associados à resistência anti-helmíntica em parasitas é uma das maneiras mais precoces de detecção da resistência, e o uso de amostras em pool pode reduzir custos e tempo de processamento e beneficiar sua aplicabilidade a campo. Entretanto, a determinação da frequência alélica de resistência (R) a partir de pool de amostras é bastante desafiadora. Assim, o objetivo deste trabalho foi desenvolver uma metodologia para a genotipagem do polimorfismo F200Y associado à resistência ao anti-helmíntico benzimidazol, em pool de larvas de três populações de H. contortus. Por meio de PCR em tempo real (qPCR), foram avaliadas as técnicas de high-resolution melting e discriminação alélica com sondas de hidrólise marcadas com fluorescência (FAM e HEX) seguida da análise por três métodos (curva sigmoide, ΔCt e log), utilizando-se curva padrão de DNA sintético (0, 20, 40, 60, 80 e 100% R) ou de larvas individuais (0, 50 e 100% R). A discriminação alélica com sondas de hidrólise, com curva padrão de larvas individuais, seguida de análise de fluorescência por log(FAM/HEX) promoveu melhor estimativa da frequência do alelo de resistência das amostras em pool, com discordância variando de 2,8 a 5,0% em relação aos valores observados na genotipagem de larvas individuais. A validação dessa técnica de genotipagem em amostras em pool poderá ser usada para a detecção da resistência anti-helmíntica em rebanhos ovinos e para a melhoria das medidas de controle da verminose, proporcionando melhor direcionamento do tratamento anti-helmíntico. | Abstrac: Haemonchus contortus is a high prevalent gastrointestinal nematode, whose control is hindered by anthelmintic resistance, leading to economic losses in sheep production. Genotyping of anthelmintic resistance-associated polymorphisms in parasites is an earlier method to detect resistance, and the use of pooled samples can reduce costs and expended time and benefit its applicability at the field. However, determining the resistance allele frequency (R) in pooled samples is quite challenging. Thus, the objective of this study was to develop a methodology for genotyping the F200Y polymorphism associated with benzimidazole resistance in pooled larvae from three H. contortus populations. Based on real-time PCR (qPCR), two methods were investigated: high-resolution melting and allelic discrimination with fluorescent (FAM and HEX) hydrolysis probes, followed by fluorescence analysis through sigmoid curve, ΔCt and log(FAM/ HEX). Synthetic DNA (0, 20, 40, 60, 80 and 100% R) or individual larvae (0, 50 and 100% R) were used as a standard curve. Allelic discrimination with hydrolysis probes with the individual larvae standard curve and fluorescence analysis by log(FAM/HEX) resulted in a better estimation of R frequency in pooled samples, varying 2.8 to 5.0% from the observed values in genotyped individual larvae. Validating this genotyping technique in pooled samples will allow its use for the detection of anthelmintic resistance in sheep flocks and improvement of nematode control practices, providing better targeting of antihelminthic treatments.
Thesagro:	Diagnostico Ovino Resistência Anti-Helmíntico Verminose
NAL Thesaurus:	Anthelmintics Gastrointestinal nematodes Sheep
Citación:	(Embrapa Pecuária Sudeste. Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento, 64)
ISSN:	1981-2078
Tipo de Material:	Folhetos
Acceso:	openAccess
Aparece en las colecciones:	Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento (CPPSE)